高效液相色譜（HPLC）是(shi)色(se)(se)譜法(fa)的(de)(de)(de)一個重要分(fen)支，其應用范圍廣泛，對樣品的(de)(de)(de)適用性廣，且不受分(fen)析對象(xiang)的(de)(de)(de)揮發性和(he)熱穩(wen)定(ding)性的(de)(de)(de)限制(zhi)。 幾(ji)乎所有(you)的(de)(de)(de)化合(he)物(wu)，包括(kuo)高(gao)沸點、極性、離子化合(he)物(wu)和(he)大分(fen)子物(wu)質都可以用高(gao)效(xiao)液(ye)相色(se)(se)譜法(fa)進行(xing)分(fen)析測定(ding)，從而彌補(bu)了(le)氣相色(se)(se)譜法(fa)的(de)(de)(de)缺點。 目前已(yi)知的(de)(de)(de)有(you)機化合(he)物(wu)中，約20%可以通過氣(qi)相色譜法進(jin)行分析，而80%需要(yao)通過(guo)高效(xiao)液相(xiang)色譜法進行分(fen)析(xi)。 高效(xiao)液相(xiang)色譜法具有分(fen)離(li)效(xiao)率(lv)高、分(fen)析(xi)速度快(kuai)、檢測靈(ling)敏度好等特點(dian)，可以分(fen)析(xi)分(fen)離(li)高沸點(dian)且不能(neng)汽化的熱不穩定生(sheng)理(li)活性物質。 分(fen)離(li)與分(fen)析(xi)技術在該領域(yu)的重要(yao)應(ying)用。

基(ji)本原(yuan)理

色譜(pu)法的分離原(yuan)理是：溶于流動相中的各組分經過固定相(xiang)時，由于(yu)與固定相(xiang)(stationphase)發(fa)生(sheng)作用(吸附(fu)、分配、排(pai)阻(zu)、親和(he))的大小(xiao)、強弱不(bu)同(tong)，在(zai)固定相中滯留時(shi)間不(bu)同(tong)，從而(er)先后從固定相中流(liu)出。又稱為(wei)色(se)層(ceng)法、層(ceng)析(xi)法。

高(gao)效液(ye)相色譜法(fa)以經典(dian)的液(ye)相色譜為基礎，以液體為流動相(xiang)，采(cai)用高壓輸液(ye)系統，將具有不(bu)同極性的(de)(de)單一溶(rong)劑或不(bu)同比例的(de)(de)混合溶(rong)劑、緩沖液(ye)等(deng)流動相泵入(ru)裝有顆(ke)粒極細(xi)的(de)(de)高效固(gu)定相的色(se)譜柱，在柱內(nei)各成分被分離后，進(jin)入檢測(ce)器進行(xing)檢測(ce)，從而實現對試樣的分析。

系統組成

HPLC 系統一般由輸液泵、進(jin)樣器、色譜柱、檢(jian)測器、數(shu)據(ju)記錄及處理裝置等組(zu)成。其中輸(shu)液泵(beng)、色譜柱(zhu)、檢測器是(shi)關鍵(jian)部(bu)件。此外，還可根據需(xu)要配置(zhi)梯(ti)度洗脫裝置、在線(xian)脫氣機(ji)、自動進樣器、預柱或保(bao)護柱、柱溫控(kong)制器等，現(xian)代HPLC 儀(yi)(yi)還有微機控(kong)制系統，進行自動化儀(yi)(yi)器控(kong)制和(he)數據處理。制備型(xing)HPLC 儀還備有自(zi)動餾(liu)分收集裝置。